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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

豬前脂肪分離自脂肪組織；脂肪組織主要由大量群集的脂肪細(xì)胞構(gòu)成，聚集成團(tuán)的脂肪細(xì)胞由薄層疏松結(jié)締組織分隔成小葉；貯存的脂肪，在需要時(shí)可迅速分解成甘油和脂肪酸，經(jīng)血液輸送到各組織以供利用。它們影響胰島素敏感性、血壓水平、內(nèi)皮功能、纖溶活動(dòng)及炎癥反應(yīng)，參與多種重要病理生理過(guò)程；脂肪組織已由過(guò)去單純作為能量?jī)?chǔ)存的器官而成為一個(gè)極其重要的內(nèi)分泌系統(tǒng)。脂肪組織在體內(nèi)含有兩種主要的細(xì)胞：一種是在胞漿內(nèi)積聚脂滴的成熟脂肪細(xì)胞；另一種是雖未在胞漿內(nèi)積聚脂滴但有這種潛能的前脂肪細(xì)胞。前脂肪細(xì)胞呈梭形，有分裂和增殖的能力；成熟的脂肪細(xì)胞呈圓形，已經(jīng)失去了分裂及增殖的能力。由于前脂肪細(xì)胞是一類(lèi)具有增殖和向脂肪細(xì)胞分化能力的特異化前體細(xì)胞，與肥胖有著非常密切的關(guān)系。前脂肪細(xì)胞是一種類(lèi)成纖維細(xì)胞，在演變的過(guò)程中不斷吸收脂質(zhì)，終成為成熟的脂肪細(xì)胞。前脂肪細(xì)胞對(duì)外界機(jī)械損傷的抵抗力較強(qiáng)，可望成為軟組織缺損的有益填充物。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的豬前脂肪采用膠原酶消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的豬前脂肪經(jīng)油紅O染色檢測(cè)，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠8異前列腺素(8-iso-PG)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： 8-iso-PG ELISA Kit

Mouse maix metalloproteinase 1 (MMP-1) ELISA Kit 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)檢測(cè)試劑盒

MouseHexokinase,HKELISAKit 小鼠己糖激酶(HK)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforhumansimilaoRIKENcDNA2010109K09geneELISAKIT人類(lèi)似RIKENcDNA2010109K09基因

通用型魚(yú)細(xì)菌性(BacterialKidneyDisease)試劑盒20次

ELISAKitFⅧ-Ag大鼠Ⅷ相關(guān)抗原

HA重組甲型流感 H5N9 (A/chicken/Italy/22A/1998) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

pectinesterase inhibitor 18 peptide 果膠酶抗原 0.5mgpectinesterase inhibitor 18 peptide 果膠酶抗原

PCSK1重組人 PCSK1 / NEC1 蛋白 Protein

EEF1E1 Protein Human 重組人 EEF1E1 / AIMP3 / p18 蛋白

FCGR3B Protein Human 重組人 CD16b / FCGR3B 蛋白

pectinesterase inhibitor 18 peptide 果膠酶抗原 0.5mgpectinesterase inhibitor 18 peptide 果膠酶抗原

EEF1E1 Protein Human 重組人 EEF1E1 / AIMP3 / p18 蛋白

HA重組甲型流感 H5N9 (A/chicken/Italy/22A/1998) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

FCGR3B Protein Human 重組人 CD16b / FCGR3B 蛋白

PCSK1重組人 PCSK1 / NEC1 蛋白 Protein

小鼠解偶聯(lián)蛋白1(UCP1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat ai cardiolipin aibody IgM (ACA-IgM) ELISA Kit 大鼠抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)檢測(cè)試劑盒

HumanCalreticulin,CELISAKit 人鈣網(wǎng)蛋白(C)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanai-calmodulinspecificaibody,CaM-ab檢測(cè)試劑盒人抗鈣調(diào)素特異抗體(CAM-ab)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物核同糖1,5二0酸羧化/加氧酶(RUBPCase/Rubisco)加氧活性定量檢測(cè)試劑盒20次

Humanα-glathioneS-ansferases，α-GSTELISAKit人αS轉(zhuǎn)移酶(α-GST)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

豬前脂肪細(xì)胞小鼠凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠抵抗素(Resistin)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。