細(xì)胞簡(jiǎn)介：

豬成骨分離自顱骨組織；顱骨位于脊柱上方，由23塊形狀和大小不同的扁骨和不規(guī)則骨組成。除下頜骨及舌骨外，其余各骨彼此借縫或軟骨牢固連結(jié)，起著保護(hù)和支持腦、感覺(jué)器官以及消化器和呼吸器的起始部分的作用。顱分腦顱和面顱兩部分。腦顱位于顱的后上部，內(nèi)有顱腔，容納腦，共8塊。面顱為顱的前下部分，包含眶、鼻腔、口腔等結(jié)構(gòu)，構(gòu)成面部的支架，共15塊。成骨細(xì)胞是骨形成的主要功能細(xì)胞，負(fù)責(zé)骨基質(zhì)的合成、分泌和礦化。骨不斷地進(jìn)行著重建，骨重建過(guò)程包括破骨細(xì)胞貼附在舊骨區(qū)域，分泌酸性物質(zhì)溶解礦物質(zhì)，分泌蛋白酶消化骨基質(zhì)，形成骨吸收陷窩；其后，成骨細(xì)胞移行至被吸收部位，分泌骨基質(zhì)，骨基質(zhì)礦化而形成新骨；破骨與成骨過(guò)程的平衡是維持正常骨量的關(guān)鍵。成骨細(xì)胞培養(yǎng)不僅有助于了解骨形成機(jī)制、骨骼系統(tǒng)疾病的分子和細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)，也是藥物篩選、生物材料開(kāi)發(fā)和生物工程研究的重要手段。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的豬成骨采用先用短時(shí)間消化、后用膠原酶反復(fù)消化制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的豬成骨經(jīng)ALP染色檢測(cè)，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體(5-HTT/SE)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： 5-HTT/SE ELISA Kit

Mouse maix metalloproteinase 4 (MMP-4) ELISA Kit 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP-4)檢測(cè)試劑盒

Mouseα-glathioneS-ansferases,α-GSTELISAKit 小鼠αS轉(zhuǎn)移酶(α-GST)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanscavengerreceptorB,SRBELISAKit人清道夫受體B

通用型植物線粒體DNA萃取試劑盒10/20次

ELISAKitGelsolin大鼠凝溶膠蛋白

HA重組甲型流感 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/1A/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

PACAP receptor-I 腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體(抗原 0.5mgPACAP receptor-I 腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體(抗原)

CSH1重組人 Placental Lactogen / CSH1 蛋白 Protein

EDEM2 Protein Human 重組人 EDEM2 / C20orf31 蛋白

C5 Protein Human 重組人 Complement C5a 蛋白

PACAP receptor-I 腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體(抗原 0.5mgPACAP receptor-I 腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體(抗原)

EDEM2 Protein Human 重組人 EDEM2 / C20orf31 蛋白

HA重組甲型流感 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/1A/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

C5 Protein Human 重組人 Complement C5a 蛋白

CSH1重組人 Placental Lactogen / CSH1 蛋白 Protein

小鼠巨噬細(xì)胞替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human lactate dehydrogenase (LDH) ELISA Kit 人乳酸脫氫酶(LDH)檢測(cè)試劑盒

HumanOsteogenicGrowthPeptide,OGPELISAKit 人成骨生長(zhǎng)肽(OGP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanai-Bburgdorleriaibody,BB-Ab檢測(cè)試劑盒人抗BB抗體(BB-Ab)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物過(guò)氧化氫(HYDROGENPEROXIDE)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20次

Humanα-Synuclein,α-SYNELISAKit人α突觸核蛋白(α-SYN)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

豬成骨細(xì)胞小鼠多巴胺D1受體(D1R)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠多巴胺(DA)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠對(duì)基苯(PABA)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠端粒酶(TE)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。