實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

兔微血管周分離自微血管組織；周細胞（pericyte）又稱Rouget細胞和壁細胞，是一種包圍全身毛細血管和靜脈中內(nèi)皮細胞的細胞，可以收縮。周細胞嵌入毛細血管內(nèi)皮細胞的基膜中，通過物理接觸和旁分泌信號與內(nèi)皮細胞進行細胞通訊，監(jiān)視和穩(wěn)定內(nèi)皮細胞的成熟過程。此外，周細胞還具有調(diào)控毛細血管血流量、細胞碎屑清除和吞噬以及血腦屏障滲透性的作用，其多功能性是目前研究的熱點之一，所以對血管周細胞的生物學(xué)特征、標記物、細胞功能等的研究都為相關(guān)研究提供基礎(chǔ)資料。周細胞產(chǎn)生手指狀的外延以調(diào)控毛細血管的血流量。周細胞和內(nèi)皮細胞之間共同擁有一個基膜，基膜上有多種細胞連接，包括多種整合素、神經(jīng)鈣黏素、纖連蛋白以及接合素。它還參與毛細血管直徑的雙向調(diào)控；毛細血管受損時，周細胞還可增殖，分化為內(nèi)皮細胞和成纖維細胞。

方法簡介：

實驗室分離的兔血管周采用膠原酶-聯(lián)合消化法及不銹鋼網(wǎng)篩過濾法結(jié)合密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔微血管周經(jīng)alpha-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔微血管周體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠蛋白激酶抑制因子β(PKIβ)檢測試劑盒 ，英文名： PKIβ ELISA Kit

L selectin (L-Selectin/CD62L) ELISA Kit 人L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑

RatIerleukin3,IL-3ELISAKIT 大鼠白介素3(IL-3)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforCyclin-D2(MouseCyclin-D2)ELISAKit小鼠細胞周期素D2

細胞色素P450亞酶CYP2C8(DBF)活性熒光定量檢測試劑盒20次

Ratfibroblastgrowthfactor-10,FGF-10ELISAKit大鼠成纖維細胞生長因子10(FGF-10)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

SERPINA3C重組小鼠 SerpinA3c 蛋白 Protein

CCL1/TCA3/I-309 嗜酸粒細胞趨化蛋白CCL1抗原 0.5mgCCL1/TCA3/I-309 嗜酸粒細胞趨化蛋白CCL1抗原

LGALS8重組人 Galectin-8 / LGALS8 蛋白 Protein

IL17RB Protein Human 重組人 IL17RB / IL-17 Receptor B 蛋白 (Flag 標簽)

ALCAM Protein Rat 重組大鼠 ALCAM / CD166 蛋白 (Fc 標簽)

CCL1/TCA3/I-309 嗜酸粒細胞趨化蛋白CCL1抗原 0.5mgCCL1/TCA3/I-309 嗜酸粒細胞趨化蛋白CCL1抗原

IL17RB Protein Human 重組人 IL17RB / IL-17 Receptor B 蛋白 (Flag 標簽)

SERPINA3C重組小鼠 SerpinA3c 蛋白 Protein

ALCAM Protein Rat 重組大鼠 ALCAM / CD166 蛋白 (Fc 標簽)

LGALS8重組人 Galectin-8 / LGALS8 蛋白 Protein

豚鼠免疫球蛋白E(IgE)檢測試劑盒 ，英文名： IgE ELISA Kit

Human low density lipoprotein receptor related protein 6 (LRP-6) ELISA Kit 人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6(LRP-6)檢測試劑盒

MonkeySolubleIercellularAdhesionMolecule-1,sICAM-1ELISAKit 猴可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBid(HumanBH3ieractingdomaindeathagonist)ELISAKit人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白

細菌尿素瓊脂平板50個

RabbitLeptospiraIgG,LepIgGELISAKit兔鉤端IgG(LepIgG)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔微血管周細胞三0酸腺苷酶   英文名稱：   Adenosine iphosphate   規(guī)格：      英文縮寫：   ATP

血管緊張素Ⅱ一型受體抗原   英文名稱：   Angiotensin 2 Receptor 1 Aigen   規(guī)格：      英文縮寫：   AT1R

抗血管緊張素‖受體︱型自身抗體   英文名稱：   Angiotensin 2 Receptor 1 Aoaibodies   規(guī)格：      英文縮寫：   AT1R-AA

血管緊張素Ⅰ   英文名稱：   AngiotensinⅠ   規(guī)格：      英文縮寫：   ANGⅠ