細(xì)胞簡(jiǎn)介：

兔胚胎肝母分離自胚胎肝組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個(gè)器官，并在身體里面起著去氧化、儲(chǔ)存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里大的器官，位于機(jī)體中的腹部位置，在右側(cè)橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟起源于腹側(cè)前腸內(nèi)胚層細(xì)胞（一種多潛能干細(xì)胞）。在 ED8.5 的小鼠和 ED9.5 的大鼠，前腸的原始上皮細(xì)胞接觸心肌中胚層后快速增殖，形成肝原基。大約1d后，原始上皮細(xì)胞侵入原始橫膈，繼續(xù)分化為幼稚肝臟上皮細(xì)胞，這些細(xì)胞先表達(dá) AFP 然后是ALb。幼稚肝臟上皮細(xì)胞很快成熟，并進(jìn)一步分化為肝細(xì)胞或膽管上皮細(xì)胞，因?yàn)榇似诘母闻K上皮細(xì)胞其具有向這兩種肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞雙向分化的潛能，所以又稱(chēng)肝母細(xì)胞。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔胚胎肝母采用膠原酶消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的兔胚胎肝母經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔胚胎肝母體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠巨噬細(xì)胞性蛋白相關(guān)蛋白1(MRP1)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： MRP1 ELISA Kit

Monkey platelet factor 4 (PF-4/CXCL4) ELISA Kit血小板因子4(PF-4/CXCL4)檢測(cè)試劑盒

Ratlymphotactin,Lptn/LTNELISAKit 大鼠淋巴細(xì)胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforfractalkine/CX3CL1ELISAKit大鼠趨化因子

細(xì)胞活力臺(tái)盼藍(lán)染色試劑盒100次

RatPhosphorylatedadenosinemonophosphateactivatedproteinkinase,AMPKELISAKit大鼠0酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

APCS重組大鼠 Serum amyloid P component / APCS / SAP 蛋白 Protein

HCV-NS1 丙型肝病毒-NS1(抗原 0.5mgHCV-NS1 丙型肝病毒-NS1(抗原)

PRSS3重組人 Trypsin-3 / PRSS3 蛋白 Protein

IFNW1 Protein Human 重組人 IFN omega 1 / IFNW1 蛋白

CD33 Protein Mouse 重組小鼠 CD33 / Siglec-3 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

HCV-NS1 丙型肝病毒-NS1(抗原 0.5mgHCV-NS1 丙型肝病毒-NS1(抗原)

IFNW1 Protein Human 重組人 IFN omega 1 / IFNW1 蛋白

APCS重組大鼠 Serum amyloid P component / APCS / SAP 蛋白 Protein

CD33 Protein Mouse 重組小鼠 CD33 / Siglec-3 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

PRSS3重組人 Trypsin-3 / PRSS3 蛋白 Protein

豚鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β3(TGFβ3)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： TGFβ3 ELISA Kit

Human pulmonary surfacta associated protein D (SP-D) ELISA Kit 人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D(SP-D)檢測(cè)試劑盒

rabbithepatocytegrowthfactor,HGFELISAKit 兔子肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBDNF(HumanBrainderivedneuroophicfacor)ELISAKit人腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子

細(xì)菌總巰基含量比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

Rabbitcyclicadenosinemonophosphate,cAMPELISAKit兔環(huán)0酸腺苷(cAMP)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔胚胎肝母細(xì)胞酸性品紅（復(fù)紅）   5g

FuchsinAcid   25g

G-418抗菌素   1g

G-418Sulfate   5g

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。