細胞簡介：

兔睪丸支持分離自睪丸；睪丸支持細胞又稱Sertoli細胞，在體內(nèi)呈不規(guī)則的高錐體形，細胞基部附著在基膜上，頂部伸至曲精小管腔面。它是生精細胞的支架，為其提供必需的營養(yǎng)物質(zhì)，能合成與分泌雄激素結(jié)合蛋白，為其提供高濃度的雄激素環(huán)境等，還具有構(gòu)成血-睪屏障，形成睪丸內(nèi)微環(huán)境，調(diào)節(jié)發(fā)生等功能。睪丸支持細胞是睪丸的主要組成細胞，能分泌多種生長因子和免疫抑制因子，不僅可為提供營養(yǎng)支持和免疫保護，也能對其他細胞，如胰島和神經(jīng)細胞提供營養(yǎng)支持，而且當其與胰島或神經(jīng)細胞共移植時，也能夠為這些細胞提供免疫保護，提高植活率。因此，睪丸支持細胞在細胞移植中具有廣泛的應用前景。制備高活率的Sertoli不僅對Sertoli的基礎研究有重要價值，而且在發(fā)生等領(lǐng)域有重要意義。

方法簡介：

實驗室分離的兔睪丸支持采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔睪丸支持經(jīng)Fas-L免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔睪丸支持體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠阿立新A(OrexinA)試劑盒   96T/48T

小鼠γ干擾素誘導蛋白16/p16(IFI16/p16)試劑盒   96T/48T

小鼠γ干擾素(IFN-γ)試劑盒   96T/48T

小鼠γ基(GABA)試劑盒   96T/48T

小鼠花生四烯酸(AA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human neuroophin 4 (-4) ELISA Kit 人神經(jīng)營養(yǎng)因子4(-4)試劑盒

humaesistinELISAKIT 人抵抗素(Resistin)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-myelinaibodyIgA,AMAIgA試劑盒人抗髓0脂抗體IgA(AMAIgA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物染色質(zhì)甲基化酶(chromomethylase)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量試劑盒20次

HumanureaserelatedproteinC,UreCELISAKit人尿素酶相關(guān)蛋白C(UreC)試劑盒規(guī)格：96T/48T

IL17RD重組狗 IL17RD 蛋白 Protein

NF-KapBp50(p50 NF-kappa B;p50NFKB 0.5mgNF-KapBp50(p50 NF-kappa B;p50NFKB) 細胞核因子50/κ基因結(jié)合核因子50抗原

CASP14重組人 Caspase-14 / CASP14 蛋白 Protein

ETHE1 Protein Human 重組人 ETHE1 / HSCO 蛋白

CD3D & CD3E Protein Mouse 重組小鼠 CD3D & CD3E Heterodimer 蛋白

NF-KapBp50(p50 NF-kappa B;p50NFKB 0.5mgNF-KapBp50(p50 NF-kappa B;p50NFKB) 細胞核因子50/κ基因結(jié)合核因子50抗原

ETHE1 Protein Human 重組人 ETHE1 / HSCO 蛋白

IL17RD重組狗 IL17RD 蛋白 Protein

CD3D & CD3E Protein Mouse 重組小鼠 CD3D & CD3E Heterodimer 蛋白

CASP14重組人 Caspase-14 / CASP14 蛋白 Protein

兔睪丸支持細胞大鼠密封蛋白(OCLN)試劑盒 ，英文名： OCLN ELISA Kit

Mouse insulin like growth factor 1 (IGF-1) ELISA Kit 小鼠胰島素樣生長因子1(IGF-1)試劑盒

RatLeukoieneC4,LT-C4ELISAKit 大鼠白三烯C4(LTC4)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGelsolin(MouseGelsolin)ELISAKit小鼠凝溶膠蛋白

細胞甘油三脂脂酶法格莫瑞(Gomori)染色試劑盒50次

RatSolubleClusterofdiffereiation30ligand,sCD30LELISAKit大鼠可溶性CD30配體(sCD30L)試劑盒規(guī)格：96T/48T

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。