細胞簡介：

兔腸神經嵴干分離自腸組織；神經嵴干細胞（neural crest stem cells，NCSC），即外周神經系統干細胞，起源于胚胎期的神經管背側，與中樞神經系統干細胞在形態學上有著顯著不同，NCSC可表達低親和力神經營養因子受體p75NTR而不能分化出少突膠質細胞，而中樞神經系統干細胞與之恰好相反。NCSC可在不同部位分化出多種組織，如神經元、神經膠質、黑色素細胞、內分泌細胞、平滑肌、骨骼肌及骨等，其中可特異性分化出腸神經系統中神經元和神經膠質的NCSC，被稱為腸神經嵴干細胞（gut neural crest stem cells，GNCSC）。

方法簡介：

實驗室分離的兔腸神經嵴干采用-膠原酶聯合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的兔腸神經嵴干經Nestin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

培養基：含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：懸浮

細胞形態：球形

傳代特性：可傳1-3代左右；3代以內狀態佳

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔腸神經嵴干體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產品：

大鼠轉化生長因子β受體Ⅰ(TGFβR1)檢測試劑盒 ，英文名： TGFβR1 ELISA Kit

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CD4 Protein Ferret 重組雪貂 CD4 / Leu-3 蛋白

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小鼠p53(p53)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat glycogen phosphorylase isoenzyme BB (GP-BB) ELISA Kit 大鼠糖原0酸化酶同工酶BB(GP-BB)檢測試劑盒

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HumancoagulationfactorⅩ,FⅩ檢測試劑盒人Ⅹ(FⅩ)檢測試劑盒規格：96T/48T

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兔型纖溶酶原激活物檢測試劑盒   兔型纖溶酶原激活物試劑盒   規格型號：96T/48T   兔型纖溶酶原激活物試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產品別名：兔型纖溶酶原激活物試劑盒、兔型纖溶酶原激活物檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

兔淋巴細胞功能相關抗原3檢測試劑盒   兔淋巴細胞功能相關抗原3試劑盒   規格型號：96T/48T   兔淋巴細胞功能相關抗原3試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產品別名：兔淋巴細胞功能相關抗原3試劑盒、兔淋巴細胞功能相關抗原3 檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

兔粒細胞集落刺激因子檢測試劑盒   兔粒細胞集落刺激因子試劑盒   規格型號：96T/48T   兔粒細胞集落刺激因子試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產品別名：兔粒細胞集落刺激因子試劑盒、兔粒細胞集落刺激因子檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。