① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：兔表皮角化細(xì)胞

英文名稱：Rabbit Epidermal Keratinized Cells

組織來(lái)源：皮膚

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

兔表皮角化分離自皮膚組織；表皮位于動(dòng)物皮膚的外層，由胚胎時(shí)期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結(jié)構(gòu)，由復(fù)層扁平上皮構(gòu)成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質(zhì)層。表皮角化細(xì)胞（KC）是構(gòu)成表皮的主要細(xì)胞成分，在體內(nèi)處于不斷增殖過(guò)程中，分裂的角化細(xì)胞主要位于其基底層，少數(shù)位于棘細(xì)胞層。隨著向表層的推移，細(xì)胞的分化程度逐漸增加，并喪失分裂活性。

實(shí)驗(yàn)室分離的兔表皮角化先消化、后-膠原酶混合消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的兔表皮角化經(jīng)PCNA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔表皮角化體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無(wú)用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細(xì)胞解離出來(lái)。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

大鼠肝X受體β(LXRβ)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： LXRβ ELISA Kit

Iestinal efoil factor (ITF) ELISA Kit 豬腸三葉因子(ITF)檢測(cè)試劑盒

人博卡病毒(HBoV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?span>) 48T

CLIAKitforMCV(Humanai-matedciullinatedvimeinaibody)ELISAKit人抗突變型瓜波形蛋白抗體

體液人體腺病毒(adenovirus)定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKitβOHB牛β

LDLR重組人 LDLR / LDL Receptor 蛋白 Protein

血管生成素樣蛋白6(ANGPTL6)重組蛋白 Recombinant Angiopoietin Like Protein 6 (ANGPTL6)

HA重組甲型流感 H5N1 (A/Indonesia/5/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

IL18RAP Protein Human 重組人 IL18RAP / IL1R7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

GP140 Protein HIV 重組人類免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 gp140 蛋白 (group M, subtype CRF07_BC)

血管生成素樣蛋白6(ANGPTL6)重組蛋白 Recombinant Angiopoietin Like Protein 6 (ANGPTL6)

IL18RAP Protein Human 重組人 IL18RAP / IL1R7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

LDLR重組人 LDLR / LDL Receptor 蛋白 Protein

GP140 Protein HIV 重組人類免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 gp140 蛋白 (group M, subtype CRF07_BC)

HA重組甲型流感 H5N1 (A/Indonesia/5/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

豚鼠卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： OVA sIgE ELISA Kit

Eighth factor related aigen (F VIII Ag) ELISA Kit 人第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)檢測(cè)試劑盒

MonkeyTumornecrosisfactorα,TNF-αELISAKIT 猴壞死因子α(TNF-α)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBGP/Gehrelin(Humanbrain-gpeptides)Elisakit人腦腸肽

細(xì)菌葡萄糖酵解酚紅瓊脂平板50個(gè)

RabbitLactoferrin,LTF/LFELISAKit兔乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔表皮角化細(xì)胞乳糖   100g

D-Lactosemonohydrate   500g

二硫赤鮮醇   5g

DL-DTE

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用