細胞簡介：

人臍帶血造血干分離自臍帶血；臍帶血是胎兒娩出、臍帶結(jié)扎并離斷后殘留在胎盤和臍帶中的血液。近十幾年的研究發(fā)現(xiàn)，臍帶血中含有可以重建造血和免疫系統(tǒng)的造血干細胞，可用于造血干細胞移植，因此，臍帶血已成為造血干細胞的重要來源。臍帶血中含有大量的干細胞，干細胞是生命的種子，它會分化成機體的各種細胞，結(jié)出各種不同的果實——血液細胞、神經(jīng)細胞、骨骼細胞等。干細胞是具有自我更新、高度增殖和多項分化潛能的細胞群體；這些細胞可以通過分裂維持自身細胞的特性和數(shù)量，又可進一步分化為各種組織細胞，從而在組織修復(fù)等方面發(fā)揮積極作用。造血干細胞具有自我更新能力并能分化為各種血細胞的前提細胞，終生成各種血細胞成分，包括紅細胞，白細胞和血小板。造血干細胞需要根據(jù)機體的生理需求適時的補充血液系統(tǒng)各個成熟細胞組分。同時在損傷、炎癥等應(yīng)激狀態(tài)下，造血干細胞也扮演著調(diào)節(jié)和維持體內(nèi)血液系統(tǒng)各個細胞組分的生理平衡的角色。臨床治療中，造血干細胞移植廣泛應(yīng)用于血液系統(tǒng)疾病以及自身免疫疾病，在其它實體瘤的治療中，比如淋巴瘤，生殖細胞瘤，乳腺癌，小細胞肺癌，主要應(yīng)用于常規(guī)治療失敗或復(fù)發(fā)難治以及具有不良預(yù)后因素的患者。造血干細胞以不對稱有絲分裂方式進行增殖，一個干細胞分裂產(chǎn)生兩個子細胞，一個分化為造血祖細胞，另一個則保持干細胞特征。造血干細胞在不斷體外培養(yǎng)產(chǎn)生大量造血祖細胞同時，保持自己既不增殖也不分化。體外培養(yǎng)微環(huán)境合適，造血干細胞可持續(xù)維持培養(yǎng) 60 天左右。 造血干細胞體外增殖培養(yǎng)需要基質(zhì)細胞滋養(yǎng)（滋養(yǎng)層細胞），缺少滋養(yǎng)層細胞不增殖，無法長期培養(yǎng)，本產(chǎn)品為收集培養(yǎng)好的造血干懸浮細胞灌裝發(fā)貨，不包含滋養(yǎng)層，因此收貨后建議盡快實驗。

方法簡介：

實驗室分離的人臍帶血造血干采用采集臍帶血、密度梯度離心、差速貼壁法結(jié)合培養(yǎng)基篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的人臍帶血造血干經(jīng)CD34免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、SCF、IL-3、TPO、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：懸浮

細胞形態(tài)：圓形

傳代特性：不建議傳代

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人臍帶血造血干體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

人載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA 試劑盒

Human tumor associated aigen (TAA) ELISA Kit 人腫瘤相關(guān)抗原(TAA)檢測試劑盒

HumanCaspase3,Casp-3ELISAKit 人胱天蛋白酶3(Casp-3)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humaninsulin-likegrowthfactors1,IGF-1檢測試劑盒人胰島素樣生長因子1(IGF-1)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)明膠法比色定量檢測試劑盒20次

HumanLebtospiraIgMELISAKit人鉤端IgM(Lebtospira)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

HA重組甲型流感 H3N2 (A/Perth/16/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

PR (Progestogerone receptor 0.5mgPR (Progestogerone receptor) 孕激素受體(抗原)

ABL1重組人 ABL1 / JTK7 / p150 蛋白 (GST 標簽) Protein

INS Protein Human 重組人 Insulin / INS 蛋白

DLL4 Protein Human 重組人 DLL4 蛋白 (Fc 標簽)

PR (Progestogerone receptor 0.5mgPR (Progestogerone receptor) 孕激素受體(抗原)

INS Protein Human 重組人 Insulin / INS 蛋白

HA重組甲型流感 H3N2 (A/Perth/16/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

DLL4 Protein Human 重組人 DLL4 蛋白 (Fc 標簽)

ABL1重組人 ABL1 / JTK7 / p150 蛋白 (GST 標簽) Protein

豚鼠白介素6(IL-6)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat angiotensinogen (aGT) ELISA Kit 大鼠血管緊張素原(aGT)檢測試劑盒

HumanAi-proteinase3aibodyIgG,PR3Ab-IgGELISAKit 人抗蛋白酶3抗體IgG(PR3Ab-IgG)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumancyclophilinA,CyPA檢測試劑盒人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織GSK3激酶總活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

HumanPolyADPribosepolymerase,PARPELISAKit人多聚ADP核糖聚合酶(PARP)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人臍帶血造血干細胞人整合素連接激酶1(ILK-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人細胞色素P450c21B/21-羥化酶(CYP21B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人細胞色素P450c21A/21-羥化酶(CYP21A)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。