實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

人卵巢顆粒分離自卵巢組織；卵巢是雌性動物的生殖器官，卵巢的功能是產生卵以及類固醇激素。卵巢的位置與睪丸相同，僅左側發育（右側已退化），呈葡萄狀，均為處于不同發育時期的卵泡，卵泡呈黃色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小與年齡和產卵期有關。大多數脊椎動物有兩個卵巢，但是部分魚類的兩個卵巢融合為單個結構，而所有鳥類只有左側卵巢有機能。卵巢是位于子宮兩側的一對卵圓形的生殖器官，它的外表有一層上皮組織，其下方有薄層的結締組織。卵巢的內部結構可分為皮質和髓質。皮質位于卵巢的周圍部分，主要由卵泡和結締組織構成；髓質位于中央，由疏松結締組織構成，其中有許多血管、淋巴管和神經。卵巢顆粒細胞是卵巢的主要功能細胞，其增殖與分化直接影響著卵泡的生長啟動、發育、排卵、黃體形成以及甾體激素分泌等卵巢功能活動。卵巢顆粒細胞是卵泡內的大細胞群，也是主要的功能細胞，卵泡發育的顯著標志之一就是顆粒細胞迅速生長及增殖，而成年動物的卵泡閉鎖主要是由顆粒細胞凋亡引起，尤其在卵泡發育后期，此外，顆粒細胞還與卵泡膜細胞共同完成卵巢激素的合成，維持著有利于卵母細胞生長和成熟的微環境。細胞形狀呈圓形或橢圓形。

方法簡介：

公司實驗室分離的人卵巢顆粒采用先機械分離，而后膠原酶消化，后差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的人卵巢顆粒經FSHR免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

人抑制素B(INH-B)ELISA 試劑盒

Human ansforming growth factor beta 2 (TGF beta 2) ELISA Kit 人轉化生長因子β2(TGFβ2)檢測試劑盒

HumanDickkopf1,DKK1ELISAKit 人Dickkopf1(DKK1)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanIerleukin11,IL-11檢測試劑盒人白介素11(IL-11)檢測試劑盒規格：96T/48T

組織科薩基病毒A(CoxsackievirusA)定量PCR擴增檢測試劑盒20次

HumanIschemiaModifiedAlbumin,IMAELISAKit人缺血修飾白蛋白(IMA)檢測試劑盒規格：96T/48T

CTLA4重組小鼠 CTLA4 / CD152 蛋白 Protein

Beta-Amyloid(1-16 0.5mgBeta-Amyloid(1-16) β淀粉樣肽1-16(多肽蛋白)

NRG1重組人 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, His 標簽) Protein

ITGA5 & ITGB1 Protein Human 重組人 ITGA5 & ITGB1 Heterodimer 蛋白

ADAM17 Protein Rat 重組大鼠 ADAM17 蛋白

Beta-Amyloid(1-16 0.5mgBeta-Amyloid(1-16) β淀粉樣肽1-16(多肽蛋白)

ITGA5 & ITGB1 Protein Human 重組人 ITGA5 & ITGB1 Heterodimer 蛋白

CTLA4重組小鼠 CTLA4 / CD152 蛋白 Protein

ADAM17 Protein Rat 重組大鼠 ADAM17 蛋白

NRG1重組人 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, His 標簽) Protein

豚鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat angiotensin conveing enzyme (ACE) ELISA Kit 大鼠血管緊張素轉化酶(ACE)檢測試劑盒

Humanglomerularbasememembraneaibogy,GBMELISAKit 人抗腎小球基底膜抗體(GBM)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCyclophosphamide,CTX檢測試劑盒人環0酰胺(CTX)檢測試劑盒規格：96T/48T

組織HCV(HEPATITISVIRUSC)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20次

HumanPoliomyelitisVirus,PV-IgGELISAKit人脊髓灰質病毒IgG(PV-IgG)檢測試劑盒規格：96T/48T

人卵巢顆粒細胞人粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人腸三葉因子(ITF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人Dickkopf1(DKK1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人11(KLK11)ELISAKit   ELISA.   96T/48T