① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細胞培養(yǎng)法

對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：人肺成纖維細胞

英文名稱：Human Lung Fibroblast Cells

組織來源：肺組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

人肺成纖維分離自肺組織；肺是機體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經(jīng)肺系（指氣管、支氣管等）與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的肺成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。肺成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括：構造和維持肺器官的正常形態(tài)，合成和釋放細胞外基質(zhì)以及組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。

公司實驗室分離的人肺成纖維采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人肺成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動物細胞的取材是原代細胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應嚴格無菌

③ 防止機械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細胞結合緊密，不利于各個細胞在體外培養(yǎng)中生長繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細胞解離出來。

(1)懸浮細胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。

(2)實體組織材料的分離方法

對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機械分散法

特點:簡便、快速,但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀)，應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。

脫氧核糖核酸酶I   100mg

DNaseI,frombovinepancreas

三0酸脫氧核苷酸混合溶液   10x0.5ml

dPMix,10mMeach(dATP,dCTP,dGTP,dTTP)   100x0.5ml

小鼠單核細胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human peptidylprolyl CIS ans isomerase (PPI) ELISA Kit 人肽基脯氨酰順反異構酶(PPI)試劑盒

HumanvonWillebrandFactor,vWFELISAKit 人血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanBcelldifferetiationfactor,BCDF試劑盒人B細胞分化因子(BCDF)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物源性飼料油菜籽(rapeseed)試劑盒20次

Humahrombinactivatablefibrinolysisinhibitor,TAFIELISAKit人纖溶抑制因子/激活的纖溶抑制物(TAFI)試劑盒規(guī)格：96T/48T

CNTNAP2重組小鼠 CNTNAP2 / CASPR2 蛋白 Protein

ATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide 0.5mgATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide) ATP酶通道蛋白抗原

ENPP2重組人 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 蛋白 Protein

FGFR4 Protein Human 重組人 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白

IL25 Protein Rat 重組大鼠 Interleukin 25 / IL25 / IL17E 蛋白 (Fc 標簽)

ATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide 0.5mgATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide) ATP酶通道蛋白抗原

FGFR4 Protein Human 重組人 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白

CNTNAP2重組小鼠 CNTNAP2 / CASPR2 蛋白 Protein

IL25 Protein Rat 重組大鼠 Interleukin 25 / IL25 / IL17E 蛋白 (Fc 標簽)

ENPP2重組人 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 蛋白 Protein

人肺成纖維細胞大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白5(IGFBP5)試劑盒 ，英文名： IGFBP5 ELISA Kit

Mouse endostatin (ES) ELISA Kit 小鼠內(nèi)皮抑素(ES)試劑盒

MouseThrombopoietin,TPOELISAkit 小鼠血小板生成素(TPO)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanCyclin-D2ELISAKit人細胞周期素D2

細胞AURORA-B激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitBMP-6大鼠骨形成蛋白6

視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用