① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細胞培養(yǎng)法

對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：大鼠椎間盤纖維環(huán)細胞

英文名稱：Rat Intervertebral Disc Fibroblast Cells

組織來源：椎間盤組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

大鼠椎間盤纖維環(huán)分離自椎間盤組織；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間，由軟骨板、纖維環(huán)、髓核組成的一個密封體。上下有軟骨板，是透明軟骨復(fù)蓋于椎體上，下面骺環(huán)中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構(gòu)成，位于髓核的四周。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊，使纖維環(huán)成為堅實的組織，能承受較大的彎曲和扭轉(zhuǎn)負荷。纖維環(huán)的前側(cè)及兩側(cè)較厚，而后側(cè)較薄。纖維環(huán)的前部有強大的前縱韌帶，后側(cè)的后縱韌帶較窄、較薄。纖維環(huán)細胞密度為9000個細胞/mm3，其外層的細胞呈梭型，主要屬于纖維細胞，內(nèi)層細胞呈圓形，主要屬于軟骨細胞。在培養(yǎng)的情況下，用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn)，它們的核較圓，核仁較明顯。細胞質(zhì)內(nèi)可見大量的附有核糖體顆粒的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。細胞質(zhì)內(nèi)線粒體多，為橢圓形，有的可看到雙層單位膜，由單位膜包繞初級深酶體和次級深酶體。細胞質(zhì)內(nèi)有一系列的扁平囊及小泡主成的高爾基復(fù)合體和分泌顆粒，纖維環(huán)細胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖維的能力很旺盛，保證纖維環(huán)生理代謝活動所需的構(gòu)造物質(zhì)的供給。一但這種供給減少，纖維環(huán)的生物性能就會減弱，椎間盤開始退變。

公司實驗室分離的大鼠椎間盤纖維環(huán)采用膠原酶-聯(lián)合消化法并結(jié)合軟骨細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠椎間盤纖維環(huán)經(jīng)Ⅰ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動物細胞的取材是原代細胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴格無菌

③ 防止機械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細胞結(jié)合緊密，不利于各個細胞在體外培養(yǎng)中生長繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細胞解離出來。

(1)懸浮細胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。

(2)實體組織材料的分離方法

對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機械分散法

特點:簡便、快速,但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。

小鼠堿性0酸酶   英文名稱：   Mouse Alkaline phosphatase   規(guī)格：      英文縮寫：   ALP

小鼠同種異體移植性因子1   英文名稱：   Mouse Allograft Inflamuatory Factor 1   規(guī)格：      英文縮寫：   AIF-1

小鼠血管生成素樣蛋白2   英文名稱：   Mouse Angiopoietin like protein 2   規(guī)格：      英文縮寫：   ANGPTL2

小鼠血管生成素樣蛋白4   英文名稱：   Mouse Angiopoietin Like Protein 4   規(guī)格：      英文縮寫：   ANGPTL4

小鼠0酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human prostacycline (PGI) ELISA Kit 人前列環(huán)素(PGI)試劑盒

Humanα-Smoothmuscleactin,α-SMAELISAKit 人α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanAdenovirusIgG,ADV-IgG試劑盒人腺病毒IgG(ADV-IgG)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植酸待測樣品處理試劑盒20次

Mousealpha-fetoproteinLensculinarisaggliin2,AFP-L2ELISAKit小鼠小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)試劑盒規(guī)格：96T/48T

PREP重組小鼠 Prolyl endopeptidase / PREP 蛋白 Protein

鈣非依賴性0脂酶A2(iPLA2)重組蛋白 Recombinant Phospholipase A2, Calcium Independent (iPLA2)

MAP1LC3B重組人 LC3B / MAP1LC3B 蛋白 Protein

DAPK3 Protein Human 重組人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 標簽)

CXCL13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CXCL13 / BCA-1 / BLC 蛋白

T-細胞免疫調(diào)節(jié)因子1(TCIRG1)重組蛋白 Recombinant T-Cell, Immune Regulator 1 (TCIRG1)

DAPK3 Protein Human 重組人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 標簽)

AARS重組小鼠 AARS / alanyl-tRNA synthetase 蛋白 Protein

EPCAM Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白

CXCL11重組人 I-TAC / CXCL11 蛋白 Protein

大鼠椎間盤纖維環(huán)細胞大鼠載脂蛋白E(APOE)試劑盒 ，英文名： APOE ELISA Kit

Mouse phospho protein kinase C (P-PKC) ELISA Kit 小鼠0酸化蛋白激酶C(P-PKC)試劑盒

MouseIerleukin9,IL-9ELISAKIT 小鼠白介素9(IL-9)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanfractalkine/CX3CL1ELISAKit人趨化因子

細胞/組織多聚賴載玻片制備試劑盒5次(50至100片)

ELISAKitMMP-9大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B

視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復(fù)蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用