實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

大鼠NG2分離自腦組織；大腦分左右兩個半球，大腦皮質（灰質）覆蓋著每個大腦半球的大部分，它是神經元胞體集中的地方。內部則是由神經纖維或髓鞘構成的白質。每一個半球都有三個面，即外側面（約占整個皮質面積的1/3）、內側面和底面（占2/3的面積）；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側面重要的溝、裂有大腦外側裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。NG2細胞是在發育和成年中樞神經系統的灰質和白質束中發現的，因表達NG2蛋白多糖而得名。NG2細胞先前被假定代表少突膠質細胞前體細胞，后來使用轉基因的研究表明，NG2細胞在體內不僅能夠產生少突膠質細胞，還能產生原漿性星形膠質細胞以及某些情況下的神經元。NG2細胞是中樞神經系統中不同于神經元、成熟少突膠質細胞、星形膠質細胞和小膠質細胞的一類細胞亞群。此外，在發育和成年中樞神經系統的多個區域，發現NG2細胞和神經元之間存在的突觸聯系，暗示NG2細胞除了可能作為分化成多種細胞的可塑性前體細胞群，還可能會和神經元聯系從而形成一個的神經膠質網絡。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠NG2采用消化、專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠NG2經NG2免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

大鼠成纖維細胞生長因子23(FGF-23)檢測試劑盒 ，英文名： FGF-23 ELISA Kit

Mouse B cell lymphoma factor 2 (Bcl-2) ELISA Kit 小鼠B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)檢測試劑盒

ELISA 小鼠可溶性白細胞分化抗原40配體(mouse sCD40L)  進口分裝

CLIAKitforLepIgG(HumanLeptospiraIgG)ELISAKit人鉤端IgG

通用型HSV(HERPESSIMPLX)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20次

ELISAKitIL-1白介素1

IFNA2重組食蟹猴 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白 Protein

IRF-1(Interferon regulatory factor-1 0.5mgIRF-1(Interferon regulatory factor-1) 干擾素調節因子抗原

FLRT2重組人 FLRT2 蛋白 Protein

GPNMB Protein Human 重組人 GPNMB / Osteoactivin 蛋白 (Fc 標簽)

IFNA2 Protein Mouse 重組小鼠 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白 (Fc 標簽)

IRF-1(Interferon regulatory factor-1 0.5mgIRF-1(Interferon regulatory factor-1) 干擾素調節因子抗原

GPNMB Protein Human 重組人 GPNMB / Osteoactivin 蛋白 (Fc 標簽)

IFNA2重組食蟹猴 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白 Protein

IFNA2 Protein Mouse 重組小鼠 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白 (Fc 標簽)

FLRT2重組人 FLRT2 蛋白 Protein

小鼠β內酰胺酶抑制劑(BLI)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat somatostatin (SS) ELISA Kit 大鼠(SS)檢測試劑盒

HumanCollagenaseIELISAKit 人膠原酶I(CollagenaseI)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCeruloplasmin,CP/CER檢測試劑盒人銅藍蛋白(CP/CER)檢測試劑盒規格：96T/48T

轉基因玉米MON810品系試劑盒20次

HumanSerotonin,STELISAKit人血清素/血清胺(ST)檢測試劑盒規格：96T/48T

大鼠NG2細胞兔子E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子結合蛋白4(RBP-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子主要組織相容性復合體Ⅲ類(MHCⅢ/RLAⅢ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔淋巴細胞功能相關抗原3(LFA-3/CD58)ELISAKit   ELISA.   96T/48T