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本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

1.操作簡(jiǎn)便、快捷。可直接加入到檢測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無(wú)需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無(wú)放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來(lái)溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。

商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Human CCL4 Protein (Animal-Free)

產(chǎn)品中文名稱：重組人趨化因子配體4（無(wú)動(dòng)物源）（CCL4）

規(guī)格：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg

貨號(hào)：EY-01X8789
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):

表達(dá)宿主:大腸桿菌

種屬:人

序列:氨基酸序列來(lái)源于：人趨化因子配體4（Ala24-Asn92）。

活性:通過(guò)其對(duì)轉(zhuǎn)染人 CCR5的 BaF3細(xì)胞的化學(xué)吸引能力來(lái)衡量。 ED??的這種效應(yīng)小于10 ng/mL。

純度:>98%，使用SDS-PAGE檢測(cè)

通過(guò)LAL法測(cè)定，每微克蛋白里內(nèi)毒素含量<0.1 EU。

產(chǎn)品形式:凍干粉，凍干緩沖液為無(wú)菌的50 mM Tris and 150 mM NaCl, pH 8.5。

使用中注意事項(xiàng):開(kāi)蓋使用前，請(qǐng)先離心。本產(chǎn)品為凍干粉，推薦用該產(chǎn)品配套的Reconstit動(dòng)?動(dòng)

背景

C-C 基序趨化因子配體4(CCL4)是一種7.66 kDa 的細(xì)胞因子，含有69個(gè)氨基酸殘基。CCL4又稱巨噬細(xì)胞炎性蛋白 -1β (MIP-1β) ，主要由中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、 B 細(xì)胞、 T 細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞分泌。

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過(guò)PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過(guò)RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過(guò)夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過(guò)夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。

公司正在出售的產(chǎn)品：

CD7 CD7抗原 0.5mgCD7 CD7抗原

IDH1 Protein Human 重組人 IDH1 蛋白

S100A6重組小鼠 S100A6 蛋白 Protein

IGFBP4 Protein Mouse 重組小鼠 IGFBP4 蛋白

HIST2H2BE重組人 Histone cluster 2 H2BE / HIST2H2BE 蛋白 Protein

小鼠Ⅰ型膠原(Col Ⅰ) ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat plasminogen activator inhibitor (PAI) ELISA Kit 大鼠纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)檢測(cè)試劑盒

Humanadrenomedullin,ADMELISAKit 人腎上腺髓質(zhì)素(ADM)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

humancoicoopieleasinghormone,CRH檢測(cè)試劑盒人促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織CHK2激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

Humanproteinphosphatase1regulatorysubunitA,PPP1R1AELISAKit人蛋酸酶1調(diào)控/抑制因子亞基1A(PPP1R1A)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔I型膠原(rabbit Collagen I)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

兔II型膠原(rabbit Collagen II)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

兔II型膠原C端肽(rabbit CTX-II)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

兔D2聚體(rabbit 2-Dimer)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

大鼠結(jié)合珠蛋白(Hpt)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： Hpt ELISA Kit

Mouse adiponectin (ADP) ELISA Kit 小鼠脂聯(lián)素(ADP)檢測(cè)試劑盒

Ratthrombospondin1,TSP-1ELISAKit 大鼠血小板反應(yīng)蛋白/敏感蛋白1(TSP-1)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforFlt3ELISAKit大鼠FMS樣酪激酶3

細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20次

Ratoxidizedlowdensitylipoproteinaibody,OLAbELISAKit大鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

重組人趨化因子配體4（無(wú)動(dòng)物源）（CCL4）S100A6重組小鼠 S100A6 蛋白 Protein

CD7 CD7抗原 0.5mgCD7 CD7抗原

HIST2H2BE重組人 Histone cluster 2 H2BE / HIST2H2BE 蛋白 Protein

IDH1 Protein Human 重組人 IDH1 蛋白

IGFBP4 Protein Mouse 重組小鼠 IGFBP4 蛋白