產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Human SCF Protein, His tag (Animal-Free)

產(chǎn)品中文名稱：重組人干細(xì)胞因子，His-標(biāo)簽無(wú)動(dòng)物源SCF

規(guī)格：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg

貨號(hào)：EY-01X8748
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):

表達(dá)宿主:大腸桿菌

種屬:人

序列:氨基酸序列來(lái)源于：人SCF (Thr25-Ala189) (P21583)的氨基酸序列，在C端帶有6×His標(biāo)簽。

活性:通過(guò)其誘導(dǎo) TF-1 細(xì)胞增殖的能力來(lái)衡量。這種效應(yīng)的 ED??小于 5 ng/mL。重組人 SCF 的比活力大于 5 x 10? IU/mg。

蛋白長(zhǎng)度：該蛋白質(zhì)的計(jì)算分子量為 19.4 kDa。在還原條件下，蛋白質(zhì)遷移為 21 kDa（SDS-PAGE 分析）。

純度:> 98 % ，使用SDS-PAGE檢測(cè)

通過(guò)LAL法測(cè)定，每微克蛋白里內(nèi)毒素動(dòng)?動(dòng)

背景

干細(xì)胞因子（SCF）是一種含有 166 個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，單體分子量約為 18.5 kDa。SCF 是酪激酶受體 c-kit 的配體，c-kit 可調(diào)節(jié)其他生長(zhǎng)因子，如粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）和白細(xì)胞介素-3，從而刺激造血干細(xì)胞的增殖和分化。成纖維細(xì)胞、平滑肌、內(nèi)皮細(xì)胞、肥大細(xì)胞和骨髓巨噬細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞等多種細(xì)胞都能產(chǎn)生 SCF。

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡(jiǎn)便、快捷。可直接加入到檢測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無(wú)需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無(wú)放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來(lái)溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過(guò)PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過(guò)RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過(guò)夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過(guò)夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。

公司正在出售的產(chǎn)品：

CD138/Syndecan-1 多配體蛋白聚糖1抗原 0.5mgCD138/Syndecan-1 多配體蛋白聚糖1抗原

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STK24重組人 STK24 / MST3 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

植物C(VC)ELISA 試劑盒

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CLIAKitforAFPELISAKit大鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白

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MouseThioredoxin,xELISAKit小鼠硫氧化還原蛋白(x)檢測(cè)試劑盒

脂聯(lián)素   英文名稱：   Adiponectin   英文縮寫：   APN/ADP   規(guī)格：  

脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白   英文名稱：   Adipocyte Fatty Acid Binding Protein   英文縮寫：   a FABP   規(guī)格：  

載脂蛋白   英文名稱：   Apolipoprotein   英文縮寫：   AI   規(guī)格：  

抗Livin 抗體   英文名稱：   Ailivin aibody   英文縮寫：   ALA   規(guī)格：

小鼠α干擾素(IFN-α)ELISA 試劑盒

Rat aquaporin 1 (AQP-1) ELISA Kit 大鼠水通道蛋白1(AQP-1)檢測(cè)試劑盒

HumanNeonatalThyroidStimulatingHormone,N-TSHELISAKit 人新生兒促甲狀腺素(N-TSH)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

HumanChorionicGonadoophinβ,β-CG檢測(cè)試劑盒人絨毛膜β(β-CG)檢測(cè)試劑盒

總微型RNA(miRNA)超濾法分離試劑盒10次

HumanSalusinαELISAKit人Salusin-α檢測(cè)試劑盒

重組人干細(xì)胞因子，His-標(biāo)簽無(wú)動(dòng)物源SCFCDH5重組小鼠 VE-Cadherin / CD144 / CDH5 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

CD138/Syndecan-1 多配體蛋白聚糖1抗原 0.5mgCD138/Syndecan-1 多配體蛋白聚糖1抗原

STK24重組人 STK24 / MST3 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

ACYP1 Protein Human 重組人 ACYP1 / Acylphosphatase-1 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

EPHA3 Protein Rat 重組大鼠 EphA3 蛋白