產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Human G-CSF Protein

產(chǎn)品中文名稱：重組人粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）

規(guī)格：10 μg/50 μg/500 μg

貨號(hào)：EY-01X8669
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):

標(biāo)簽:無(wú)標(biāo)簽

表達(dá)宿主:大腸桿菌

種屬:人

序列:氨基酸序列來源于：人源 G-CSF（Thr31-Pro204）表達(dá)的蛋白片段。

活性:通過其誘導(dǎo)M-NFS-60細(xì)胞增殖的能力來測(cè)定。該效應(yīng)的ED50為0.2569 ng/mL。

蛋白長(zhǎng)度：重組人粒細(xì)胞集落刺激因子由174個(gè)氨基酸組成，在N端有一個(gè)Met標(biāo)簽，預(yù)測(cè)分子質(zhì)量為 18.7 kDa。

純度:> 98 % ，使用SDS-PAGE檢測(cè)

采用 LAL 法檢測(cè)，每 1 μg 蛋白質(zhì)中的 EU 含量小于 1.0。

產(chǎn)品形式:凍干粉，凍干緩沖液為無(wú)菌的 PB動(dòng)?動(dòng)

背景

粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）是 CSF 系列糖蛋白中的一種，可調(diào)節(jié)造血細(xì)胞的增殖、分化和功能。它是一種關(guān)鍵的細(xì)胞因子，參與中性粒細(xì)胞的生成，并刺激造血祖細(xì)胞形成粒細(xì)胞集落（Metcalf 和 Nicola）。G-CSF 可產(chǎn)生一系列效應(yīng)，包括一過性減少 SDF-1 的表達(dá)、激活能裂解 VCAM-1 的金屬蛋白酶、從交感神經(jīng)系統(tǒng)釋放，從而導(dǎo)致造血干細(xì)胞從骨髓釋放或動(dòng)員到外周。

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡(jiǎn)便、快捷。可直接加入到檢測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無(wú)需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無(wú)放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：

Beta-Amyloid (31-35 0.1mgBeta-Amyloid (31-35) β淀粉樣肽31-35(多肽蛋白)

ACPP Protein Human 重組人 Prostatic Acid Phosphatase / ACPP 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CADM3重組小鼠 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

LIFR Protein Rat 重組大鼠 LIFR 蛋白 (His 標(biāo)簽)

TXNL4B重組人 Dim2 / TXNL4B 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

植物激素脫落酸(ABA)ELISA 試劑盒

Human ai RNP aibody (RNP-Ab) ELISA Kit 人抗核糖核蛋白抗體(RNP-Ab)檢測(cè)試劑盒

Porcineinsulin-likegrowthfactorsbindingprotein3,IGFBP-3ELISAKit 豬胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAFA(Humanai-filaggrinaibody)ELISAKit人抗角蛋白絲聚集素/絲集蛋白抗體

血液氧化型(GSSG)濃度比色法定量檢測(cè)試劑盒50次

MousesubstancePreceptor,SP-RELISAKit小鼠P物質(zhì)受體(SP-R)檢測(cè)試劑盒

整合素α2β1   英文名稱：   Iegrin α2β1   規(guī)格：      英文縮寫：   Iegrin α2β1

整合素α5β3   英文名稱：   Iegrin α5β3   規(guī)格：      英文縮寫：   Iegrin α5β3

β-整合素   英文名稱：   β-Iegrin   規(guī)格：      英文縮寫：   β-Iegrin

誘導(dǎo)型合酶   英文名稱：   induced niic oxide syhas   規(guī)格：      英文縮寫：   iNOS

小鼠內(nèi)皮抑素(ES)ELISA 試劑盒

Rat basic fibroblast growth factor 6 (bFGF-6) ELISA Kit 大鼠堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子6(bFGF-6)檢測(cè)試劑盒

HumanfibrinopeptideA,FPAELISAKit 人血纖肽/纖維蛋白肽A(FPA)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

Human8-epi-prostaglandinF2alpha,8-epi-PGF2α檢測(cè)試劑盒人8-異構(gòu)前列腺素F2α(8-epi-PGF2α)檢測(cè)試劑盒

正常大鼠(SpragueDawley)肝組織微粒體組分(5毫克/毫升)500微升

Mouseai-IVIgGaibodyELISAKit小鼠抗IVIgG抗體檢測(cè)試劑盒

重組人粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）CADM3重組小鼠 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

Beta-Amyloid (31-35 0.1mgBeta-Amyloid (31-35) β淀粉樣肽31-35(多肽蛋白)

TXNL4B重組人 Dim2 / TXNL4B 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

ACPP Protein Human 重組人 Prostatic Acid Phosphatase / ACPP 蛋白 (His 標(biāo)簽)

LIFR Protein Rat 重組大鼠 LIFR 蛋白 (His 標(biāo)簽)

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。