產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Ethidium Homodimer-1 (EthD-1)

產(chǎn)品中文名稱：Ethidium Homodimer-1 (EthD-1)

規(guī)格：1 mg/10 mg

貨號：EY-01X8564
用途：僅供科研研究實驗

特點&優(yōu)勢:

•   λEx/λEm: 528/617 nm(結(jié)合DNA), 493 nm(未結(jié)合DNA) 。

保存建議:4℃，避光保存 12 個月。

運輸條件:藍冰運輸

背景

Ethidium Homodimer-1是一種高親和性的熒光核酸染料，與DNA或RNA結(jié)合后，可以使熒光增強30多倍。由于帶有較強正電荷，所以該染料不能穿過細胞膜進行活細胞染色，但是可以準確的檢測溶液中的核酸或者解體細胞中的核酸，是一種較靈敏的核酸染色劑。

本產(chǎn)品具有下列特點:

 1.操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：

ADM R, Adrenomedullin receptor 腎上腺髓質(zhì)素受體(抗原 0.5mgADM R, Adrenomedullin receptor 腎上腺髓質(zhì)素受體(抗原)

IL1B Protein Human 重組人 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (pro form, His 標簽)

CDNF重組小鼠 CDNF / ARMETL1 蛋白 Protein

F11R Protein Rat 重組大鼠 JAM-A / F11R 蛋白 (Fc 標簽)

CDK2AP2重組人 CDK2AP2 蛋白 Protein

豚鼠巨噬細胞移動抑制因子(MIF)檢測試劑盒 ，英文名： MIF ELISA Kit

Human amyloid precursor protein (APP) ELISA Kit 人淀粉樣前體蛋白(βAPP)檢測試劑盒

MonkeyIerleukin1,IL-1ELISAKit白介素1(IL-1)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBGP(Osteocalcin/BoneGla-protein)ELISAKit兔骨鈣素檢測試劑盒

細菌氫/ATP酶(H+/K+-ATPase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

RabbitIerleukin9,IL-9ELISAKit兔子白介素9(IL-9)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

乳酸（LD）測試盒（測全血）   Lactic acid (LD) test case (whole blood)

乳酸（LD）測試盒（測血清、組織等）   Lactic acid (LD) test case (serum, tissue, etc.)

乳酸脫氫酶（LDH）測試盒   Lactate dehydrogenase (LDH) test kit

蘋果酸脫氫酶測試盒（測血清）   Apple acid dehydrogenase test case (Ce Xueqing)

小鼠氧還原蛋白過氧化物酶4(PRDX4)檢測試劑盒

Hypoxia inducible factor 1 alpha (HIF-1 alpha) ELISA Kit 大鼠低氧誘導因子1α(HIF-1α)檢測試劑盒

Human5-lipoxygenase,5-LO/LOXELISAKit 人5脂加氧酶(5-LO/LOX)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor15-LO/LOX(Mouse15-lipoxygenase)ELISAKit小鼠15脂加氧酶

飲料比色法定量檢測試劑盒20次

MouseLeptieceptor,LR/Ob-RELISAKit小鼠苗條素受體(LR/Ob-R)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

Ethidium Homodimer-1 (EthD-1)CDNF重組小鼠 CDNF / ARMETL1 蛋白 Protein

ADM R, Adrenomedullin receptor 腎上腺髓質(zhì)素受體(抗原 0.5mgADM R, Adrenomedullin receptor 腎上腺髓質(zhì)素受體(抗原)

CDK2AP2重組人 CDK2AP2 蛋白 Protein

IL1B Protein Human 重組人 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (pro form, His 標簽)

F11R Protein Rat 重組大鼠 JAM-A / F11R 蛋白 (Fc 標簽)

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達載體

1、載體酶切:將表達質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達質(zhì)粒的表達菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。

(四)誘導表達

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。