產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Nuclei Extraction Kit (High Purity)

產(chǎn)品中文名稱：細(xì)胞核分離提取試劑盒（高純度）

規(guī)格：20 T/100 T

貨號(hào)：EY-01X8552
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):

•  從哺乳動(dòng)物細(xì)胞和組織中，快速分離提取純的脆弱的細(xì)胞核

•  通過(guò)稠密的蔗糖墊層進(jìn)行超速離心，以保護(hù)細(xì)胞核并去除細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)污染物。

保存建議:請(qǐng)參閱說(shuō)明書中各個(gè)組分的存儲(chǔ)條件。自發(fā)貨之日起，在推薦溫度下至少穩(wěn)定12個(gè)月。

運(yùn)輸條件:藍(lán)冰運(yùn)輸

背景

從細(xì)胞核制備提取物通常是許多細(xì)胞生物學(xué)研究的第一步，例如體外細(xì)胞凋亡，細(xì)胞轉(zhuǎn)錄狀態(tài)檢測(cè)和核組分來(lái)源（染色質(zhì)，基因組DNA，組蛋白和核RNA / RNP）。

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡(jiǎn)便、快捷。可直接加入到檢測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無(wú)需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無(wú)放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來(lái)溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：

ADAMTS7 peptide 整合素樣金屬蛋白酶與1型-7抗原 0.5mgADAMTS7 peptide 整合素樣金屬蛋白酶與1型-7抗原

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 His, His 標(biāo)簽)

FCGR4重組小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His & AVI 標(biāo)簽), Biotinylated Protein

EPCAM Protein Rat 重組大鼠 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

WWP2重組人 WWP2 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

小鼠肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(HGFR/ c-MET)檢測(cè)試劑盒

Human varicella zoster virus IgG (VZV-IgG) ELISA Kit 人水痘帶狀皰疹病毒IgG(VZV-IgG)檢測(cè)試劑盒

HumanAi-ThrombinⅢ,AT-ⅢELISAKit 人抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

Humanai-ophoblastaibody,ATA檢測(cè)試劑盒人抗滋養(yǎng)膜細(xì)胞抗體(ATA)檢測(cè)試劑盒

植物氧化應(yīng)激活性氧(ROS)比色法定量檢測(cè)試劑盒(超氧陰離子)20次

Humanansferfactor，TFELISAKit人轉(zhuǎn)移因子(TF)檢測(cè)試劑盒

小鼠25羥基D3(25(OH)D3/25HVD3)檢測(cè)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

小鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)檢測(cè)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)檢測(cè)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

小鼠Ⅰ型膠原N末端肽(X)檢測(cè)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

大鼠胎球蛋白B(FETUB)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： FETUB ELISA Kit

Mouse glucocoicoid receptor beta (GR- beta) ELISA Kit 小鼠糖皮質(zhì)激素受體β(GR-β)檢測(cè)試劑盒

RatCalcitonin,CTELISAKit 大鼠降鈣素(CT)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHLA-A(HumanleukocyteaigenA)ELISAKit人類白細(xì)胞抗原A

細(xì)胞PKG-Iβ激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitBF大鼠B因子

細(xì)胞核分離提取試劑盒（高純度）MAPK1重組小鼠 ERK2 / MAPK1 / MAPK2 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)重組蛋白 Recombinant Corticotropin Releasing Hormone (CRH)

GUCA1A重組人 GCAP1 / GUCA1A 蛋白 Protein

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 His, His 標(biāo)簽)

TNFRSF14 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 HVEM / TNFRSF14 蛋白

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過(guò)PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過(guò)RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過(guò)夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過(guò)夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。