細(xì)胞簡介：

腸指的是從胃幽門至的消化管。腸是消化管中長的一段，也是功能重要的一段。哺乳動物的腸包括小腸、大腸和直腸 3大段。

腸壁結(jié)構(gòu)一般分 4層，由外向內(nèi)依次為：漿膜層，平滑肌層，粘膜下層和粘膜層。粘膜層又分為3層：靠近粘膜下層的是一層平滑肌，稱為粘膜肌層。其次為結(jié)締組織，又稱為固有層。后面向腸腔的是一層柱狀上皮細(xì)胞構(gòu)成的粘膜。小腸粘膜有縱行和橫行皺襞，并有無數(shù)細(xì)小的指狀突起，稱為絨毛。絨毛的基底處粘膜內(nèi)陷成管狀，稱為利貝屈恩氏隱窩。

隱窩基底部的上皮細(xì)胞不斷地進(jìn)行有絲分裂，產(chǎn)生新細(xì)胞。隱窩上皮中還有許多杯狀細(xì)胞，它分泌粘液，起滑潤食物和保護(hù)粘膜的作用。大腸內(nèi)無絨毛，其大部分上皮細(xì)胞分泌粘液。直腸的上皮細(xì)胞也分泌粘液。

細(xì)胞特性：

1）組織來源于實(shí)驗(yàn)動物兔的腸道組織。

2)細(xì)胞鑒定： 角蛋白 (PCK)熒光染色法 。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細(xì)胞生長方式：上皮樣，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 DELF 原代 上皮 細(xì) 胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

Pigc-fosELISAKit

大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)elisa分析檢測試劑盒

Rat DPPⅣ ELISA Kit

山羊睪酮(T)elisa分析檢測試劑盒

GoatTestosteroneELISAKit

冰凍切片組織DHPR受體蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒

蘋果酸脫氫酶MDH測試盒測組織 50管/48樣 紫外比色法

超微量ATP酶測試盒測Ca2+－ATP酶 50管/25樣 100管/50樣 比色法

小鼠抗肌蛋白(UTRN)elisa檢測試劑盒

血清淀粉樣蛋白A(SAA)elisa分析檢測試劑盒

SAA ELISA Kit

人蛋白水解誘導(dǎo)因子/皮離蛋白(PIF/DCD)elisa分析檢測試劑盒

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維生素B12高效液相色譜法定量檢測試劑盒

豚鼠膽囊收縮素A受體(CCKAR)elisa檢測試劑盒

大鼠色素上皮衍生因子(PEDF)elisa檢測試劑盒

植物氧化應(yīng)激活性氧（ROS）比色法測定試劑盒（單線態(tài)氧氣）

粘蛋白19抗體

MUC19

補(bǔ)體C2b鏈多肽抗體

C2b

轉(zhuǎn)錄延伸調(diào)節(jié)蛋白1抗體  Anti-TCERG1/CA150

環(huán)指蛋白2抗體  Anti-RING2/RNF2

鈉鈣交換蛋白2抗體  Anti-NCX2/SLC8A2

染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白1抗體  Anti-SMC1

辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗豬IgG H&L

魚胰島素樣生長因子1受體(IGF-1R)elisa生化檢測試劑盒

IGF-1R ELISA Kit

人穿孔素/成孔蛋白(PRF1/PFP)elisa生化檢測試劑盒

兔腸粘膜上皮細(xì)胞HumanPRF1/PFPELISAKit