實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

臍帶血是胎兒出生時臍帶內(nèi)及胎盤近胎兒一側(cè)血管內(nèi)的血液。臍帶血中含有多種成分。目前，臍帶血已經(jīng)成為的造血干細胞的重要來源之一。此外，臍帶血中還含有豐富的間充質(zhì)干細胞。臍帶血中的干細胞含量豐富，明顯超過外周血含量，相當或超過骨髓中的含量，其間充質(zhì)干細胞因其可以在體外誘導分化為多種組織細胞，以再生和修復病變或損傷的組織細胞，因此目前的應用比較廣泛。

細胞特性：

1）細胞來源于實驗動物的臍血。

2)細胞鑒定：CD44熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細胞生長方式：梭形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 DELF 原代成纖維細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

公司正在出售的產(chǎn)品：

兔半胱酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA 試劑盒

Rat aldehyde dehydrogenase (ALDH) ELISA Kit 大鼠乙脫氫酶(ALDH)檢測試劑盒

Humanskieactivefactor/inflammatoryfactor,SRF/IFELISAKit 人皮膚反應因子/性因子(SRF/IF)檢測試劑盒 進口分裝

HumanGlycogenphosphorylaseII,GP-II檢測試劑盒人糖原0酸化酶同工酶II(GP-II)檢測試劑盒

組織蛋白酶(PROTEASE)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Humanmonocytechemotacticprotein2,MCP-2ELISAKit人單核細胞趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)檢測試劑盒

CD3D重組食蟹猴 CD3d / CD3 delta 蛋白 (His 標簽) Protein

MMP-2 基質(zhì)金屬蛋白酶-2(多肽抗原 0.5mgMMP-2 基質(zhì)金屬蛋白酶-2(多肽抗原)

CCL8重組人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 標簽) Protein

ALOX15B Protein Human 重組人 ALOX15B / 15 Lipoxygenase 2 蛋白

BTLA Protein Mouse 重組小鼠 BTLA 蛋白

MMP-2 基質(zhì)金屬蛋白酶-2(多肽抗原 0.5mgMMP-2 基質(zhì)金屬蛋白酶-2(多肽抗原)

ALOX15B Protein Human 重組人 ALOX15B / 15 Lipoxygenase 2 蛋白

CD3D重組食蟹猴 CD3d / CD3 delta 蛋白 (His 標簽) Protein

BTLA Protein Mouse 重組小鼠 BTLA 蛋白

CCL8重組人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 標簽) Protein

豬促甲狀腺素釋放激素(H)ELISA 試劑盒

Human macrophage inflammatory protein 2 (MIP-2) ELISA Kit 人巨噬細胞性蛋白2(MIP-2)檢測試劑盒

Porcinegrowthhormonereleasingpeptide-Ghrelin,GHRP-GhrelinELISAKit 豬生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitforAlphaActin(HumanAlpha-Actin)ELISAKit人α肌動蛋白

血液0酸二酯酶4(PDE4)活性熒光定量檢測試劑盒10次

Mouseα-HydroxybyrateDehydrogenase,αHBDHELISAKit小鼠α羥基脫氫酶(αHBDH)檢測試劑盒

兔臍帶血間充質(zhì)干細胞豬(HYD)ELISAKit   ELISA. 

豬(NO)ELISAKit   ELISA. 

豬內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISAKit   ELISA. 

豬內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)ELISAKit   ELISA.

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。