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    庚肝抗體IgM檢測試劑盒在被冷凍后使用會有影響嗎?
    點擊次數:2684 更新時間:2021-12-27
      由于庚肝抗體IgM檢測試劑盒保存的特殊性,使得不少的操作者對冷凍后的產品產生了疑問:ELISA檢測試劑盒被冷凍后再使用有影響嗎?對此,我司ELISA檢測試劑盒技術員建議ELISA試劑盒解凍后一次用完,并作出解釋:
      ELISA檢測試劑盒的保質期一般都是在一年,如果保存得當的話,不會出現問題的。但不要反復凍融。當然如果是正常的ELISA試劑盒,應該放在4℃左右冰箱保存。
      但要注意的是,如果將試劑盒剛從冰箱里面拿出來就立即使用的話,可能會影響,其直接的后果是對一些弱陽性標本的檢測出現假陰性。建議:先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,再進行測定,以使試劑盒在ELISA檢測試劑盒使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應步驟中,能使反應微孔內的溫度能較快地達到所要求的高度,以滿足測定要求。
      已開封或者使用后,剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存,ELISA檢測試劑盒開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃,避免潮濕。
      庚肝抗體IgM檢測試劑盒操作步驟
      1.包被過程(注意設置空白對照,陰性對照):
      將所用抗原用包被稀釋液稀釋到適當濃度(一般所需抗原包被量為每孔20-200μg),每孔抗原加入100μl,置37℃,4h,或4℃,24h;棄去孔中液體.(為避免蒸發,板上應加蓋或將板平放在底部有濕紗布的金屬濕盒中)。
      2.封閉酶標反應孔:
      5%小牛血清置37℃封閉40min,封閉時將封閉液加滿各反應孔,并去除各孔中的氣泡,封閉結束后用洗滌液滿孔洗滌3遍,每遍3min。
      洗滌方法:吸干孔內反應液,將洗滌液注滿板孔,放置2min略作搖動,吸干孔內液,傾去液體后在吸水紙上拍干。洗滌次數3次
      3.加入待檢測樣品(建立合適的濃度梯度):
      檢測時一般采用1:50-1:400的稀釋度,應采用較大稀釋體積進行,一般保證樣品吸取量>20μl。
      將稀釋好的樣品加入酶標反應孔中,每樣品至少加雙孔,每孔100μl,置于37℃,40-60min.用洗滌液滿孔洗滌3遍,每遍3min。
      4.加入酶標抗體:
      酶標抗體:根據酶結合物提供商提供的參考工作稀釋度進行,37℃,30-60min之間,短于30min往往結果不穩定.每孔加100μl.洗滌同前。
      5.加入底物液(現用現配):
      TMB-過氧化氫尿素溶液,OPD-過氧化氫底物液系統次之。
      底物加入量:每孔100μl,置37℃避光放置3-5分鐘,加入終止液顯色。
      6.終止反應:
      每孔加入終止液50μl終止反應,于20min內測定實驗結果。
      7.結果判斷:
      庚肝抗體IgM檢測試劑盒OPD顯色后采用492nm波長,TMB反應產物檢測需要450nm波長。檢測時一定要首先進行空白孔系統調零,用測定標本孔的吸收值與一組陰性標本測定孔平均值的比值(P/N)表示,當P/N大于2時作為抗體的效價。(數值的大小依具體檢測要求而定)
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