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    植物乙酰羧化酶合成酶(ACC)ELISA試劑盒現貨供應
    點擊次數:996 更新時間:2017-03-22

    VE Elisa Kit試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被乙酰羧化酶合成酶(ACC)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的乙酰羧化酶合成酶(ACC)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
    樣品收集、處理及保存方法
    1.  樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。
    2.  標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行。
    3.  植物萃取液或其它相關樣本:請1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測。
    4.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
    植物乙酰羧化酶合成酶(ACC)ELISA試劑盒操作注意事項
      試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶*溶解后再使用。
      實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
      濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍,zui終結果乘以5才是樣本實際濃度。
      嚴格按照VE Elisa Kit說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
      所有液體組分使用前充分搖勻。
    試劑盒組成
    注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、1、2、4、8、16 U/L
    試劑的準備
     20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
    洗板方法
      手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
      自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
    操作步驟
      從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
      設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
      樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。
      除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
      棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
      每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
      每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
    結果判斷
     繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。
    植物乙酰羧化酶合成酶(ACC)ELISA試劑盒試劑盒性能
    1.  準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,大于等于0.9900。
    2.  靈敏度:zui低檢測濃度小于0.1 U/L。
    3.  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
    4.  重復性:板內、板間變異系數均小于15%。
    5.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
    6.  VE Elisa Kit有效期:6個月

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